La técnica de amplificación de ADN mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es una; técnica que consiste en la amplificación in vitro de un fragmento de ADN específico, es una técnica de biología molecular desarrollada en 1986 por Kary Mullis. Su objetivo es obtener un gran número de copias de un fragmento de ADN particular, partiendo de una mínima cantidad; en teoría basta partir de una única copia de ese fragmento original, o molde. Utiliza secuencias cortas de ADN llamados cebadores para seleccionar la parte del genoma a amplificar. Permite replicar entre cientos de miles y millones de veces, en el transcurrir de pocas horas e in vitro, pequeñas cantidades de ADN. 2- Hibridación de los iniciadores a la zona 3´ específica de cada una de las hebras.
Su utilidad es que tras la amplificación resulta mucho más fácil identificar con una muy alta probabilidad, virus o bacterias causantes de una enfermedad, identificar personas (cadáveres o parientes) o hacer investigación científica sobre el ADN amplificado. Debido a que la PCR utiliza DNA como materia prima, se requiere desnaturalizarlo para convertir la doble hélice en una cadena sencilla, luego los pequeños fragmentos conocidos (cebadores, o primers o iniciadores o partidores) se hibridan en la región de amplificación y la polimerasa junto con los desoxinucleotidos trifosfatados (dNTP’s) , llevan a cabo la polimerización de la cadena nueva. En este proceso se dan aumentos y reducciones de temperatura, un conjunto de las tres etapas, desnaturalización, hibridizacion y extensión se conoce como ciclo y estos pueden ser muchos de acuerdo a la técnica de PCR empleada. Con esta técnica se pueden producir un billón de copias de la secuencia en estudio en sólo unas pocas horas.
Otros Conceptos Relacionados con la PCR
Sensibilidad
Se refiere a la cantidad mínima de ADN necesaria para que se produzca la amplificación, es decir, para obtener una banda. Se relaciona con los falsos negativos, ya que puede que una muestra sea positiva, pero sea dada como negativa porque no se ha amplificado por no tener suficiente cantidad de ADN.
Especificidad
Se refiere a la obtención de un solo producto amplificado. Viene determinada por los oligos y la especificidad con la que se unen al ADN molde. De esta forma, si los oligos tienen más de un sitio al que se pueden unir aparecerá más de un producto amplificado. Se relaciona con los falsos positivos, ya que puede que una muestra sea negativa pero sea dada como positiva porque se ha amplificado una región de ADN no diana o que no se buscaba amplificar.
Eficiencia
Se refiere a la amplificación máxima que se puede obtener en un número determinado de ciclos.
Fidelidad
Se refiere a los errores que comete la ADN polimerasa durante la amplificación. Este concepto es de especial importancia en la secuenciación, pero en otros casos no es tan importante. Una buena fidelidad permite evitar falsos positivos y/o negativos.
